Formulation d’un système de transport d’exosomes chargé de dopamine

Résumé

Source : Yavuz, B., et al. Formulation et caractérisation d’un système de transport de dopamine basé sur des exosomes. J. Vis. Exp. (2022)

Cette vidéo démontre la formulation d’exosomes chargés en dopamine, en se concentrant sur la perméabilisation membranaire induite par la saponine pour améliorer l’encapsulation de la dopamine dans les exosomes.

Protocole

1. Charge de dopamine dans les exosomes

REMARQUE : Une fois la caractérisation des exosomes des cellules souches mésenchymateuses de Wharton’s Jelly (WJ-MSCs) terminée, des exosomes chargés en dopamine ont été obtenus en tant que système d’administration de médicaments. Le chargement du médicament dans les exosomes est effectué à l’aide de la méthode d’incubation.

1. Ajouter 3 ml de solution saline tamponnée au phosphate (PBS) à la suspension d’exosomes. Stériliser la suspension diluée par filtration à l’aide de filtres de 0,22 μm. Transférez 500 μL de la suspension d’exosomes stérilisés dans un autre tube.
2. Préparez une solution de dopamine (0,5 mg/mL) avec de l’eau distillée. Ajoutez 500 μL de solution de dopamine dans les tubes contenant les exosomes.
3. Ajoutez de la saponine à la suspension à l’étape 1.2. Incuber la suspension d’exosome-dopamine préparée pendant 24 h à 37 °C. REMARQUE : La concentration de saponine ne doit pas dépasser 0,002 % de la solution totale.
4. Ultracentrifuger la suspension à 90 000 × g pendant 70 min pour éliminer la dopamine libre et la saponine du milieu. Conservez les exosomes isolés à -20 °C jusqu’à ce qu’ils soient utilisés pour une analyse plus approfondie. note: Ajouter 0,02 % d’acide ascorbique pour la stabilité de la solution de dopamine préparée.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
0.22 μm filtre à membrane	Aisimo		Utilisé pour le processus de stérilisation
15 mL Falcon tube	Nest		Utilisé dans l’étape de culture cellulaire
50 mL Falcon	tube Nest		Utilisé dans la cellule étape de culture
Centrifuge	Hitachi	CF16RN	Utilisé dans l’étape d’isolement des exosomes
Chlorhydrate de dopamine H8502-10G	Sigma	H8502-10G	Utilisé dans le chargement de la dopamine des exosomes
Optima XPN-100 Ultracentrifuge	Beckman Coulter		Utilisé dans l’étape d’isolement des exosomes
Comprimé PBS	Biomatik	43602	Dans la préparation de la solution PBS
Saponin	Sigma	47036-50G-F	Il a été utilisé en l’ajoutant à la solution totale dans le processus de chargement de l’exosome dopamine.
Cellules souches mésenchymateuses de Wharton	ATCC